为您的实验选择合适的显微镜

在计划显微镜实验时，首先要做的是确定您可以访问的系统以及它们的配置方式；检查您的实验室和核心设施中的系统。确保显微镜具有过滤器和/或激光来对您计划使用的染料进行成像，并且如果您的实验需要，它们具有在长时间流逝期间保持细胞存活的孵化系统。

比较不同成像方式的相对性能表格1. 一般来说，对于常规成像，宽场落射荧光是一个很好的起点：它易于使用并且具有相对较好的灵敏度和速度。对于厚度超过 20 μm 的样品，值得考虑使用共聚焦显微镜，尤其是在Z分辨率高的情况下是必需的，或者如果样品被浓密染色。激光扫描共聚焦显微镜在抑制离焦光和获取 3D 图像数据方面非常出色，但一般而言，它比旋转圆盘共聚焦显微镜灵敏度低且光毒性更大。对于需要 3D 信息的活体标本，应考虑使用旋转圆盘共聚焦显微镜。旋转圆盘共聚焦显微镜也非常适合获得关于小物体的高分辨率 3D 信息，例如用 100×/1.4 NA 油物镜对酵母进行成像。对于膜成像或盖玻片几百纳米范围内的任何其他样品，应考虑使用 TIRF 显微镜。最后，如果您可以使用光片显微镜或其他专业显微镜，了解其功能并考虑它是否适合您的实验。

表格1：

成像方式的性能。

速度、灵敏度和光毒性分别从最差到最好被评为 +、++ 和 +++。最大样品厚度是一个指导原则，通过仔细的样品制备，通常可以对较厚的样品进行成像。

显微镜的性能在很大程度上取决于其组件的细节及其配置方式。出于这个原因，在尝试新的成像实验以确定哪个最能满足您的需求时，尝试多个系统通常是有意义的。当地的显微镜专家，例如核心主任，通常可以帮助您选择合适的显微镜。您可能还需要考虑更改您使用的荧光标签，或调整您的实验设计，以充分利用您可以使用的显微镜。