点扫描共聚焦显微镜与光学切片相结合
点扫描共聚焦显微镜与光学切片相结合
荧光宽视野显微镜
萤光宽视场显微镜。
广视角荧光显微镜是最普通、最简单的荧光显微镜。准直(不聚集或散射)激发光离开显微镜，以均匀的照射整个视场。传回目标的荧光会被采集到照相机上，以便可见。用相对于采集荧光的方向照射样本，称为“Epi”辐照。所以，它们有时被称为落射荧光显微镜。(参见上面左图)以获得样例图片。
共焦显微镜点扫描
在荧光显微镜技术中，点扫描共聚焦显微镜与光学切片相结合。光切是指能够从一个较厚的三维样品上的单个薄平面(见图1)；与MRI或CT扫描相似。这种方法可以通过把激发光聚焦到样品中的一个点上，并用光栅扫描一次像素地构造最终图像来实现。在到达检测器前，采集的荧光穿过针孔。为了只允许从焦面发出的光到达检测器，针孔是用来排除从上面或者下面发出的。
并联共聚焦显微镜(圆片)
并联共焦镜(旋光片)可加快获得共焦像的速度。一幅一幅像素的组合是非常缓慢的；因此，一些共焦显微镜使用并行化来改善性能。盘转盘显微镜中，含有多个孔的金属圆盘在激发光路上转动。每一个孔洞对应样品的不同位置。因为一次有多个孔洞被照亮，获得图像的速度更快。
2-光子显微镜。
光子显微镜主要解决了宽视野显微镜和共焦显微镜两大缺陷。第一种方法是，宽场和共聚焦显微镜将激发光投射到样品的轴向体积。结果表明，在采集大量光学切片时，不只是聚焦体积内的荧光团，而是连续地对整个样品进行照射。这样可以加快光漂白速度，降低信号强度。2光子显微镜把激发(和漂白)局限于单一的焦点。这种方法可以用红光代替蓝光激发GFP分子，从而达到这种效果，因为红光的能量约为蓝光的一半，与一束蓝光相比，要激发GFP，需要两个红光光子。要达到这一目的，只能在物镜的焦点上建立足够高的红光子密度。
对红光的另一个好处是：红光能深入生物组织。要证明这一点，只需要把闪光灯放在你的手掌上。虽然白色光线进入你的双手，但在组织中只能看见橙色/红色光。这样，2光子就可以更深层次地形成厚组织成像。
光片显微镜
光学显微镜一般采用两个或更多的物镜结构，以产生一层与采集荧光的成像物镜相垂直的薄层激光发光。和2光子显微镜一样，一次只激发一个焦面，这就限制了光漂白。类似于广视场，整个视场可同时被激发并被单个摄像机曝光捕捉。这样做的速度要比依赖于共聚焦和2光子显微镜的栅格扫描更快。
全内光显微镜(TIRF)
全内镜(TIRF)是一种技术，它只在盖玻片旁激发极细的荧光分子层。光线在某一角度穿过一层盖玻片，当它到达样品与水基缓冲液之间的界面时，它就会被完全反射。这一反射是由玻璃与样品浸入的水缓冲液中的折射率不匹配所造成的。虽然激发光被完全反射，但是光能通过激发荧光团的消逝波，到达样品中的纳米玻璃/水界面。
超分辨显微镜
高分辨率显微镜可以在光学显微镜的极限下进行衍射(分辨率)成像。因为光线的波动性，当经过显微镜光学装置到达检测器时，光线就会变得模糊成200-300纳米光点。这就是说，两个或更多的处于衍射极限的物体，在最终图像中将作为物体出现。近二十年来，许多技术被发展成允许亚衍射极限成像。这些技术大多能使光学显微镜的分辨率提高2-10倍(见图1)。
