细胞显微镜的最佳实践

复合显微镜的基于透镜的放大倍率仍然是该技术的基础，但研究人员现在能够成像的深度（包括活细胞）是惊人的。无论是一年还是世纪，显微镜都是实验室的主要技术。让我们回顾一些显微镜最佳实践，以保持您的技术达到标准。

提示1：保持清洁

使用复合显微镜或立体显微镜时，请始终保持仪器清洁。要清洁镜片，首先使用骆驼毛刷或罐装空气清除所有灰尘和污垢。然后，用镜头清洁溶液润湿 Q-tip 的末端，并使用圆周运动清洁光学表面。使用干燥的 Q-tip，使用相同的圆周运动来干燥表面。对于镜片溶液，Windex 和醋的组合效果很好。不使用时使用防尘罩存放显微镜。

提示 2：确保曝光时间正确

在使用显微镜相机进行荧光成像期间曝光时间适当时，您将看到与背景区域和明亮区域相关的分离峰。曝光时间太短会使该区域变暗并合并两个峰。相反，太长的曝光时间会使信号饱和，并在最大信号电平处形成陡峭的悬崖。一些图像采集软件具有自动调整功能，可定义信号强度和显示亮度之间的长度。

提示 3：对于活细胞成像，选择正确的技术

敏感样品的生物成像需要一种能够在保持材料生理完整性的同时捕获图像的技术。该方法应最大限度地减少光漂白、光毒性和其他潜在有害结果，同时还提供超清晰的分辨率。其中一些属性取决于您的样本。例如，如果您正在处理较厚的动态样品，请使用旋转圆盘共聚焦、多光子或光片显微镜。对于薄的动态样品，请使用荧光宽场、全内反射或光片。如果您正在处理较厚的静态样品，请使用点扫描共聚焦、多光子或光片显微镜。最后，如果您的样品很薄且静态，请使用宽场或超分辨率。

提示 4：测试自发荧光

处理活细胞时，处理自体荧光会缩短宝贵的成像时间。它还可能导致漂白或光毒性。核黄素、色氨酸和酚红是众所周知的罪魁祸首。因此，为了提高信噪比，您可以通过使用不含酚红的介质来减少非特异性背景荧光。无论您选择哪种成像技术，请务必事先测试自发荧光。

提示 5：建立有利的环境条件

长期活细胞成像需要对环境条件进行一定程度的控制，以保持样品的活力，尤其是温度和大气。虽然大多数哺乳动物细胞在 37°C 下生长，但如果使用细菌或酵母细胞，则可能需要更高或更低的温度。如果您尚未手动预设适当的温度，请更改您的工作流程以包括某种类型的温度控制步骤。大气控制也是如此。对于哺乳动物细胞，应始终保持5% CO 2 /95% 空气的理想气氛。建立并保持这些环境条件允许进行活细胞成像，而没有样品降解的风险。